Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:30 мин. • March 4th, 2025
Получение химически фиксированной ткани спинного мозга от мышей, индуцированных аутоиммунной демиелинизацией в определенные моменты времени во время прогрессирования заболевания.
Болезнь заставляет аутореактивные иммунные клетки атаковать белки миелина, разрушая миелиновую оболочку, окружающую нейронные аксоны.
Клетки-предшественники олигодендроцитов рекрутируются в пораженный участок, созревают в олигодендроциты и реформируют миелиновую оболочку.
Промойте ткань буфером, чтобы удалить излишки фиксатора, затем обработайте ее осмием, который связывается с липидами миелина и усиливает контраст для визуализации.
Наносите красители тяжелых металлов, которые связываются с макромолекулами и усиливают контрастность.
Обезвоживайте ткани с помощью повышения концентрации спирта. Возьмите ткань, залитую смолой, и получите ультратонкие срезы.
С помощью электронной микроскопии измерьте толщину миелиновой оболочки, чтобы классифицировать аксоны как демиелинизирующие с набухшей, более толстой оболочкой, демиелинизирующие без оболочки или ремиелинизирующие с тонкой оболочкой.
Выявить повреждение аксонов, характеризующееся уменьшением расстояния между нейрофиламентами и отеком митохондрий или полной дегенерацией.
Анализируйте прогрессирование аксонального повреждения и восстановление с течением времени, чтобы оценить прогрессирование заболевания.