JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:25 мин • March 4th, 2025
Возьмите несъемные участки зрительного нерва у контрольной крысы и крысы с повреждением зрительного нерва.
На контрольном участке представлены аксоны с плотно упакованными миелиновыми оболочками, содержащими концентрические слои плазматической мембраны. На поврежденном срезе наблюдается декомпактированный миелин с большими промежутками.
Инкубируется с комплексом осмий-ферроцианид, который связывается с липидами и усиливает контраст миелиновой оболочки.
Обработайте тиокарбогидразидом для создания дополнительных сайтов связывания осмия.
Повторно нанесите осмий для дальнейшего усиления липидного контраста.
Окрашивают тяжелыми металлами, которые связываются с макромолекулами и усиливают структурный контраст.
Обезвоживайте с помощью увеличивающейся концентрации спирта и промойте ацетоном для добавления смолы.
Поместите ткань в смолу и покройте смолу золотом, чтобы улучшить качество изображения.
Используйте последовательную сканирующую электронную микроскопию с блочной поверхностью для одновременной резки и получения изображений. Сфокусируйте электронный луч на поверхности и обнаруживайте обратно рассеянные электроны для создания изображений.
Миелиновые оболочки кажутся темными, в то время как пространства внутри поврежденных оболочек кажутся светлее, что позволяет дифференцировать нормальный и поврежденный миелин.