Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:30 мин. • March 4th, 2025
Возьмем, к примеру, крысу, у которой ограничен приток крови к правому полушарию мозга, что привело к повреждению ГЭБ.
Внутривенно вводят меченный флуорофором альбумин, который проникает через поврежденный ГЭБ, достигая мозга.
Получите химически фиксированные участки мозга.
Добавьте блокирующий буфер для предотвращения связывания неспецифических антител.
Применяйте пероксидаза-конъюгированные антитела, нацеленные на меченный флуорофором альбумин.
Добавьте хромогенный субстрат, который пероксидаза превращает в электронно-плотный осадок.
Введите тетраоксид осмия для фиксации липидов мембраны и усиления контраста.
Обезвоживайте участки с возрастающей концентрацией алкоголя.
Добавьте уранилацетат, который связывается с нуклеиновыми кислотами и белками для повышения контрастности.
Снова обезвоживаем с увеличением концентрации спирта, заканчивая оксидом пропилена для заливки смолы. Заделайте срезы в смолу.
Микроскопически идентифицируют и иссекают участки, окрашенные хромогеном.
Повторно заделите эти срезы в смолу и подготовьте ультратонкие ломтики.
Закрепите срезы на сетках электронной микроскопии (ЭМ).
Окрашивание цитратом свинца для усиления контраста внеклеточного матрикса.
Перейдите с помощью EM для проверки целостности BBB.