JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:30 мин • March 4th, 2025
Возьмем, к примеру, фиксированную формалином ткань человеческого мозга, встроенную в парафин. В ткани присутствуют патогенные микробы, присутствующие как внутри клеток, так и внеклеточно.
Промойте, чтобы удалить парафин, затем увлажните ткань с помощью убывающей концентрации спирта.
Нагрейте кислотным буфером, чтобы разорвать индуцированные формалином белковые сшивки, демаскируя антигенные эпитопы на бактериях.
Инкубировать с хлоридом аммония для нейтрализации образующихся при фиксации остаточных реакционноспособных альдегидных групп, предотвращая неспецифическое взаимодействие с антителами.
Обработайте моющим средством, чтобы проникнуть в клеточные мембраны, способствуя проникновению антител.
Нанесите блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.
Инкубируют с первичными антителами, нацеленными на внеклеточные и внутриклеточные микробы.
Применяйте флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.
Добавьте флуоресцентный ДНК-связывающий краситель для окрашивания ядер.
Обработайте аутофлуоресцентным элиминатором для гашения флуоресценции автофлуоресцентных внутриклеточных гранул, минимизируя фоновые сигналы.
С помощью флуоресцентной микроскопии исследуют ткани, чтобы подтвердить наличие микробов.