Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:25 мин. • March 4th, 2025
Начните с мозговой ткани мыши в экстракционном буфере, содержащем ингибиторы протеазы и моющее средство.
Гомогенизируйте ткань для высвобождения белков в буфер. Ингибиторы протеазы блокируют активность протеазы, предотвращая деградацию белка.
Центрифугируйте и соберите надосадочную жидкость с белками.
Добавьте загрузочный буфер, содержащий моющее средство и восстановитель, чтобы денатурировать белок.
Загрузите белки из контроля и образца в гель SDS-PAGE. Подайте действие электрического поля, чтобы разделить белки на отдельные полосы.
После электрофореза перенесите белковые полосы на мембрану.
Обработайте мембрану буфером, содержащим обезжиренное молоко, чтобы блокировать неспецифические участки взаимодействия.
Инкубируйте с первичными антителами, которые специфически связываются с фосфорилированными тау-белками.
Промойте и инкубируйте с конъюгированными ферментами вторичными антителами.
Добавьте субстрат, который вступает в реакцию с ферментом для получения светового сигнала, подтверждающего фосфорилированные тау-белки.
Интенсивная светящаяся полоса в образце по сравнению с контролем позволяет предположить нейродегенеративную патологию.