JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:30 мин • March 4th, 2025
Начнем с белков спинномозговой жидкости, включая фосфорилированный альфа-синуклеин, биомаркер нейродегенеративных заболеваний.
Добавьте загрузочный буфер, содержащий моющее средство, восстановитель и краситель для слежения.
Нагрейте, чтобы денатурировать белки, затем загрузите их в гель SDS-PAGE.
Проведите электрофорез для разделения белков по молекулярной массе на отдельные полосы.
Инкубируйте гель в промокательном буфере с перемешиванием.
Затем электропереносите белковые полосы из геля на мембрану.
Обработайте мембрану фиксатором для удержания белка на мембране, затем промойте.
Инкубируйте с блокирующим раствором, содержащим первичные антитела и ингибиторы фосфатазы, для поддержания фосфорилирования альфа-синуклеина.
Антитела взаимодействуют исключительно с фосфорилированным альфа-синуклеином, а блокирующие реагенты блокируют неспецифические сайты взаимодействия, затем промываются.
Введите конъюгированные с ферментом вторичные антитела, которые взаимодействуют с первичными антителами, затем промойте.
Добавьте хемилюминесцентный субстрат, взаимодействуя с ферментами и генерируя хемилюминесценцию.
Хемилюминесцентная полоса подтверждает наличие фосфорилированного альфа-синуклеина.
В данной статье представлен протокол определения фосфорилированного альфа-синуклеина — биомаркера, связанного с нейродегенеративными заболеваниями. Метод включает электрофорез в ПААГ с SDS и вестерн-блоттинг для визуализации присутствия белка.
Определение фосфорилированного альфа-синуклеина в белках ЦСМ с помощью вестерн-блоттинга представляет собой надежный инструмент для валидации биомаркеров нейродегенеративных заболеваний на ранних стадиях. Данный рабочий процесс позволяет проводить количественную оценку посттрансляционных модификаций, что способствует снижению механистических рисков и повышению уверенности в выборе мишеней для портфелей исследований нейродегенерации. Надежная детекция обеспечивает информационную базу для трансляционных исследований и приоритизации значимых для заболевания мишеней.
Данный протокол вестерн-блоттинга интегрирован в континуум исследований нейродегенеративных заболеваний — от этапа поиска до доклинических испытаний, обеспечивая связь между ранней валидацией биомаркеров и трансляционными исследованиями.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 22 августа 2026