Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:23 мин. • March 4th, 2025
Возьмите регидратированный участок больной ткани мозга человека, содержащий тельца Леви, или LB.
Инкубировать с раствором перекиси водорода для ингибирования эндогенных пероксидаз и предотвращения неспецифического окрашивания.
Нагрейте срез в цитратном буфере, чтобы демаскировать эпитопы альфа-синуклеина в ЛБ.
Нанесите блокирующий агент для предотвращения связывания неспецифических антител.
Удалите избыток блокатора и инкубируйте участок с первичными антителами, нацеленными на альфа-синуклеин.
Смойте несвязанные антитела.
Применяют биотинилированные вторичные антитела, которые связываются с первичными антителами.
Удалите излишки антител.
Добавьте стрептавидин-биотин-пероксидазные комплексы, которые связываются с биотинилированными вторичными антителами.
Смойте несвязанные комплексы.
Нанесите красящий субстрат, который вступает в реакцию с пероксидазой, образуя коричневые осадки.
Удалите лишний субстрат.
Обработайте противодействующим красителем, чтобы окрасить ядра в синий цвет, усиливая контраст с окрашенным в коричневый цвет альфа-синуклеином внутри LB в цитоплазме нейронов под микроскопом.