Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:27 мин. • March 4th, 2025
Изолируйте зрительный нерв от трансгенных мышей с черепно-мозговыми травмами через определенные промежутки времени после травмы. Нерв содержит нейроны, экспрессирующие флуоресцентный белок.
С помощью флуоресцентной микроскопии визуализируйте поврежденный нерв, в котором наблюдается прогрессирующее увеличение отеков и разъединения аксонов.
Зафиксируйте ткань для сохранения клеточных структур.
Промойте ткань, чтобы удалить излишки фиксатора.
Обработайте раствором ферроцианида осмия, который связывается с липидами миелиновой оболочки и повышает контрастность для визуализации.
Промойте ткань, затем инкубируйте в соединении тяжелых металлов, которое связывается с макромолекулами и усиливает контраст.
Обезвоживайте ткань с помощью повышения концентрации спирта и заделывайте в смолу.
Получают поперечные и продольные срезы и обрабатывают их соединениями тяжелых металлов, улучшая контраст.
Под электронным микроскопом на продольных срезах обнаруживается прогрессирующее развитие аксональных отеков с накопленными набухшими митохондриями, везикулами, мембранными отливами и нарушенными цитоскелетными структурами.
Поперечные срезы показывают прогрессирующее разрушение миелиновых оболочек, что указывает на аксональную дегенерацию.