JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:29 мин • March 4th, 2025
Начните со среза мозга, богатого дофаминергическими нейронами.
Инкубируйте срез в aCSF, содержащем флуоресцентные ложные нейротрансмиттеры или FFN.
FFN являются pH-чувствительными маркерами, которые имитируют дофамин и флуоресцируют более интенсивно в нейтральной, чем в кислой среде.
Эти FFN избирательно проникают в дофаминергические нейроны и загружаются в кислотные синаптические везикулы, где изменение pH снижает флуоресценцию FFN.
Перенесите этот срез в камеру для визуализации, закрепите ее и непрерывно перфузируйте с помощью aCSF, чтобы удалить несвязанные FFN.
Визуализируйте срез, чтобы подтвердить накопление FFN в виде флуоресцентных точек.
Затем расположите стимулирующий электрод для подачи электрической стимуляции.
Электрические импульсы вызывают поступление кальция в нейрон, вызывая слияние синаптических везикул с мембраной нейрона и высвобождение FFN во внеклеточную синаптическую щель.
В среде с нейтральным pH синаптической щели флуоресценция FFN усиливается.
Снова визуализируйте срез, чтобы наблюдать диффузную флуоресценцию во внеклеточном пространстве, подтверждающую высвобождение FFN из синаптических везикул.