Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:28 мин. • March 4th, 2025
Начните с спинномозговой жидкости, или ликвора, собранной у людей разного возраста.
Центрифугируйте образец для гранулирования клеточного мусора и соберите надосадочную жидкость.
Надосадочная жидкость содержит белки, участвующие в генерации нейронов или нейрогенезе.
Возьмите мультилуночный планшет, покрытый стрептавидином. Добавьте блокирующий агент для предотвращения неспецифической привязки.
Добавьте меченные биотином захватывающие антитела, селективные к конкретным белкам, связанным с нейрогенезом.
Инкубируйте с перемешиванием, чтобы антитела связывались со стрептавидином, затем промойте пластину.
Добавьте образец спинномозговой жидкости вместе с антителами, меченными рутением, в лунки, затем инкубируйте с перемешиванием.
Специфические белки, связанные с нейрогенезом, связываются с антителами захвата и взаимодействуют с антителами обнаружения одновременно.
Тщательно вымойте пластину и добавьте буфер обнаружения.
Поместите пластину в систему визуализации.
Буфер обнаружения инициирует световое излучение рутения.
Снижение интенсивности света в образцах указывает на возрастное снижение уровня белка, связанного с нейрогенезом, что подтверждает снижение нейрогенеза.