JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:29 мин • March 4th, 2025
Начните с совместного культивирования астроцитов и дифференцировочных агрегатов нейрональных стволовых клеток в дифференцировочных средах.
Астроциты выделяют сигнальные молекулы, которые усиливают созревание и дифференцировку стволовых клеток в нейроны и астроциты.
Далее добавьте фиксатор для сохранения структуры клеток с последующим промыванием.
Добавьте раствор моющего средства, чтобы проникнуть в клеточные мембраны, затем постирайте.
Введите блокирующий реагент для блокирования неспецифических сайтов связывания.
Добавьте первичные антитела, которые специфически связываются с белковыми маркерами зрелых нейронов и астроцитов. Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.
Затем добавьте зеленые и красные флуоресцентно меченные вторичные антитела и инкубируйте. Эти антитела связываются с соответствующими первичными антителами, обеспечивая отчетливую флуоресценцию в клетках.
Введите ядерный краситель, чтобы окрасить ядра в синий цвет.
Наконец, понаблюдайте за клетками с помощью конфокального микроскопа.
Внутри агрегатов зеленые флуоресцентные клетки указывают на зрелые нейроны, в то время как красные флуоресцентные клетки представляют астроциты. Это подтверждает межклеточные взаимодействия в содействии созреванию нейронов.