Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:23 мин. • March 4th, 2025
Возьмем химически фиксированный мозг мыши, подвергшейся хроническому стрессу.
Стресс нарушает функцию олигодендроцитов, нарушая богатую липидами миелиновую оболочку, окружающую нейронные аксоны в медиальной префронтальной коре, области мозга, регулирующей эмоции.
Повторно нанесите фиксатор для сохранения архитектуры тканей. Погрузите ткань в криопротектор для замены воды, предотвращая образование кристаллов льда при замораживании.
Заморозьте мозг, затем разделите его на корональные срезы.
Закрепите ломтики на предметных стеклах, затем увлажните их в воде, чтобы улучшить проникновение пятен.
Нагрейте ломтики в растворе, содержащем ионы золота. Эти ионы избирательно связываются с липидами в миелиновой оболочке и образуют металлические золотые отложения, обозначающие миелинизированные нейроны.
Нагрейте восстановителем, чтобы уменьшить избыток ионов золота, затем промойте, чтобы удалить их и обезвожить ткань с помощью увеличения концентрации спирта.
Используйте ксилол для повышения прозрачности тканей и закрепите предметные стекла.
С помощью микроскопии визуализируйте окрашенные золотом миелинизированные нейроны и оцените изменения, вызванные стрессом.