Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:21 мин. • May 30th, 2025
Возьмите фиксированный участок кортикальной ткани мозга мыши, на котором видны нейронные аксоны и дендриты. Дендриты обладают выступами, известными как дендритные шипы, которые образуют синапсы с аксонами.
Инкубируйте ткань с ферроцианидом осмия, который связывается с липидами, после чего следует еще одно применение осмия, которое усиливает структурный контраст для визуализации.
Окрашивание соединением тяжелого металла, которое связывается с макромолекулами и усиливает контраст.
Обезвоживайте с помощью увеличения концентрации спирта для заделки смолы.
Поместите ткань в смолу, закрепите ее на держателе и покройте золотом для оптимизации качества изображения.
Используйте сканирующую электронную микроскопию с сфокусированным ионным лучом для трехмерной визуализации.
С помощью ионного пучка удалите тонкий слой ткани, залитой смолой, обнажив поверхность изображения.
Сфокусируйте электронный луч на открытой поверхности и обнажите обратно рассеянные электроны для создания изображения.
Выполните серийный срез и визуализацию и реконструируйте трехмерное изображение, выявив синаптически связанную корковую нейронную сеть.