JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:25 мин • August 29th, 2025
Начните с массива микролунок, покрытого инертным слоем по всей его плоской поверхности.
Добавьте на массив суспензию бактериальных клеток, позволив им осесть в лунках.
Снимите покрытие, чтобы удалить поверхностные клетки, сохранив те, которые локализованы в лунках.
Затем закрепите массив микролунок между распорками.
Возьмите предметное стекло с неадгезивным покрытием и нанесите на него раствор гидрогелевого предшественника, содержащий синтетический полимер и растворенный в буфере сшивающий агент.
Переверните предметное стекло на массив и инкубируйте. Сшивающий агент вступает в реакцию с полимером с образованием пористого гидрогеля, который захватывает клетки.
Снимите предметное стекло и поместите матрицу в среду, которая поддерживает рост бактерий и содержит антибиотики для предотвращения заражения.
Замкнутые бактерии размножаются в пространственно различные колонии.
Гидрогель содержит фоторазлагаемые поперечные связи, которые разрываются под воздействием ультрафиолетового света, что позволяет целенаправленно разлагать гидрогель для селективной экстракции бактериальных колоний.
Засейте 700 микролитров суспензий бактериальных клеток с наружным диаметром 600 0,1 на субстрат микролуночной матрицы и приготовьте раствор гидрогелевого предшественника, как было показано ранее, используя 12,5 микролитров фосфатно-солевого буферного раствора ATGN pH 8. Пипеткой нанесите 12,5 микролитров раствора прекурсора на нереактивное перфторалкилированное стеклянное стекло и поместите две стальные прокладки размером 38 микрометров на две противоположные стороны подложки микролуночного массива, окультуренной клетками. Затем переверните предметное стекло с помощью перфторалкилированного стекла с каплей раствора прекурсора и поместите каплю в середину подложки микролунки.
Когда гидрогель образуется после инкубации в течение 25 минут при комнатной температуре, аккуратно снимите предметное стекло с субстрата микролунки и поместите субстрат в чашку Петри, содержащую среду ATGN с добавлением антибиотика.