Разделение внутренней и наружной мембранных фракций грамотрицательных бактерий
Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:47 мин. • August 29th, 2025
Начните с общей мембранной фракции грамотрицательных бактерий, включая внутренние и внешние мембранные пузырьки, взвешенные в сахарозе низкой плотности, которая сохраняет структурную целостность.
Чтобы отделить мембранные пузырьки, последовательно добавьте в ультрацентрифужную пробирку растворы сахарозы высокой и средней плотности.
Затем добавьте мембранную фракцию и сахарозу низкой плотности, чтобы создать прерывистый градиент сахарозы.
Ультрацентрифуга для разделения везикул в зависимости от их плотности.
Менее плотные внутренние мембранные пузырьки образуют слой в верхней части.
Более плотные внешние мембранные везикулы, богатые липополисахаридами и белками, образуют полосу на границе растворов сахарозы средней и высокой плотности.
Соберите внутренний слой мембраны и выбросьте градиентный раствор, оставив небольшое количество.
Затем соберите внешний слой мембраны.
Добавьте буфер хранения к каждой фракции для стабилизации.
Центрифугой отделите пузырьки и удалите надосадочную жидкость.
Очищенные мембранные пузырьки ресуспендируют, гомогенизируют и хранят при низких температурах для дальнейшего анализа.
Чтобы приготовить градиент сахарозы, держите полипропиленовую или ультрапрозрачную пробирк
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео