Why is negative staining with uranyl acetate used for vesicle visualization?

Negative staining with uranyl acetate enhances contrast by surrounding vesicles with electron-dense material, enabling clear visualization of morphology and size under TEM.

How does vesicle adsorption onto resin-coated grids support imaging consistency?

Adsorption onto polyvinyl formal resin-coated grids ensures uniform vesicle adherence, reducing variability in sample distribution for reproducible TEM analysis.

What quantitative measurements enable assessment of vesicle purity?

TEM imaging allows measurement of vesicle size, shape homogeneity, and detection of contaminants, supporting purity assessment for downstream applications.

Why are replication requirements important for vesicle preparation workflows?

Replication ensures consistent vesicle adsorption, staining, and drying steps, which is critical for generating reliable data across cross-functional teams.

What statistical analysis capabilities are required before implementing vesicle imaging in discovery pipelines?

Basic morphometric analysis tools are needed to quantify size distribution and shape uniformity, enabling statistical comparison of vesicle populations across experimental conditions.

Визуализация внеклеточных везикул цианобактерий с помощью просвечивающей электронной микроскопии

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:01 min • August 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поместите поливиниловую просвечивающую электронную микроскопию или сетку ПЭМ на чистую пластиковую пленку.

Добавьте в сетку суспензию концентрированных и очищенных внеклеточных везикул или ВВ, наноразмерных, связанных с мембраной частиц.

Эти ВВ выделяются цианобактериями и переносят макромолекулы внутри своих мембран.

Инкубируйте решетку, чтобы электромобили могли адсорбироваться на ее покрытой смолой поверхности.

Прикоснитесь к краю решетки чистой фильтровальной бумагой, чтобы впитать излишки взвеси.

Поплавайте сетку на уранилацетате, чтобы испачкать прилипшие пузырьки.

Уранилацетат окружает везикулы, создавая темный контур, повышающий контрастность во время визуализации.

Снимите сетку и используйте фильтровальную бумагу, чтобы впитать излишки пятна.

Промойте решетку сверхчистой водой, чтобы удалить остатки пятен. Повторите стирку, а затем дайте ему высохнуть на воздухе.

Наконец, визуализируйте электромобили с помощью ПЭМ для оценки их морфологии, размера и чистоты.

Осторожно нанесите пять микролитров пузырька и дайте ему настояться в течение пяти минут. Извлеките образец, прикоснувшись краем сетки к листу чистой фильтровальной бумаги.

Нанесите пипеткой от 20 до 50 микролитров 2%-ного уранилацетата на плоскую поверхность, покрытую полиэтиленовой пленкой. Затем поместите плавающую на нем сетку на две минуты. Удалите уранилацетат с помощью фильтровальной бумаги и кратковременно поплавайте на капле сверхчистой воды для мытья.