Визуализация внеклеточных везикул цианобактерий с помощью просвечивающей электронной микроскопии

Поместите поливиниловую просвечивающую электронную микроскопию или сетку ПЭМ на чистую пластиковую пленку.

Добавьте в сетку суспензию концентрированных и очищенных внеклеточных везикул или ВВ, наноразмерных, связанных с мембраной частиц.

Эти ВВ выделяются цианобактериями и переносят макромолекулы внутри своих мембран.

Инкубируйте решетку, чтобы электромобили могли адсорбироваться на ее покрытой смолой поверхности.

Прикоснитесь к краю решетки чистой фильтровальной бумагой, чтобы впитать излишки взвеси.

Поплавайте сетку на уранилацетате, чтобы испачкать прилипшие пузырьки.

Уранилацетат окружает везикулы, создавая темный контур, повышающий контрастность во время визуализации.

Снимите сетку и используйте фильтровальную бумагу, чтобы впитать излишки пятна.

Промойте решетку сверхчистой водой, чтобы удалить остатки пятен. Повторите стирку, а затем дайте ему высохнуть на воздухе.

Наконец, визуализируйте электромобили с помощью ПЭМ для оценки их морфологии, размера и чистоты.

Осторожно нанесите пять микролитров пузырька и дайте ему настояться в течение пяти минут. Извлеките образец, прикоснувшись краем сетки к листу чистой фильтровальной бумаги.

Нанесите пипеткой от 20 до 50 микролитров 2%-ного уранилацетата на плоскую поверхность, покрытую полиэтиленовой пленкой. Затем поместите плавающую на нем сетку на две минуты. Удалите уранилацетат с помощью фильтровальной бумаги и кратковременно поплавайте на капле сверхчистой воды для мытья.