Процедура забора бактерий и механического лизиса

Возьмем культуру золотистого стафилококка, бактерии с толстой пептидогликановой клеточной стенкой.

Разведите культуру в свежей среде, содержащей антибиотики, и инкубируйте ее при теплой температуре с встряхиванием, чтобы способствовать росту бактерий.

Переложите культуру в пробирку и центрифугируйте ее, чтобы гранулировать бактерии.

Выбросьте надосадочную жидкость и положите гранулу на лед, чтобы защитить бактерии от повреждений.

Повторно суспендируйте гранулу в буфере для лизиса и переложите ее в пробирку, содержащую гранулы диоксида кремния.

Вставьте трубку в инструмент для механического лизиса клеток и начните перемешивание.

Быстрые столкновения между бактериями и шариками создают поперечные силы. Это лизирует бактерии, высвобождая ДНК, РНК и РНК-белковые комплексы.

Ионы в буфере для лизиса стабилизируют структуры РНК, в то время как восстановители в буфере инактивируют ферменты, разрушающие РНК.

Теперь снова центрифугируйте смесь, чтобы измельчить мусор.

Соберите надосадочную жидкость, содержащую нуклеиновые кислоты и белки, для дальнейшего анализа.

Вырастите одну колонию штаммов, несущих либо pCN51 P3 MS2 sRNA, либо pCN51 P3 MS2 плазмиды в трех миллилитрах среды BHI с добавлением 10 мкг