Разделение бактерий по количеству капсул с помощью прерывистого градиента плотности

Начните с пробирки, содержащей заданный прерывистый градиент плотности, приготовленной с использованием нетоксичных частиц коллоидного диоксида кремния, покрытых поливинилпирролидоном.

Градиент состоит из трех неперекрывающихся слоев, расположенных в порядке возрастания плотности сверху вниз.

Возьмем библиотеку мутантных бактериальных транспозонов, объединенную суспензию бактериальных штаммов со случайными мутациями, индуцированными транспозонами.

Подмножество этих мутаций разрушает гены, которые регулируют капсулу, полисахаридный слой, окружающий клеточную стенку бактерии, что приводит к образованию штаммов с различным количеством капсул

.

Добавляйте бактериальную библиотеку в верхнюю часть градиента очень медленно, не смешивая интерфейс.

Центрифугируйте пробирку с умеренной скоростью.

Градиент способствует дифференциальной миграции бактерий в зависимости от количества их капсул

.

Гиперкапсулированные штаммы, будучи менее плотными из-за их гидратированного полисахаридного слоя, локализуются ближе к вершине.

Слабо капсулированные штаммы оседают в середине, а некапсулированные, более плотные штаммы мигрируют на дно.

Отделенные штаммы бактерий готовы к последующему анализу.

Аккуратно добавьте 60