Анализ in vivo для корреляции бактериальной биолюминесценции с плотностью клеток

Возьмем, к примеру, колонии бактерий, трансформированные с помощью плазмиды, содержащей индуцируемый ген.

Выберите одну колонию для инокуляции свежей жидкой среды.

Инкубируйте с встряхиванием для насыщения кислородом и равномерного роста бактерий.

Используйте разбавленный образец культуры для измерения абсорбции и оценки плотности клеток.

Возьмите луночную пластину со стеклянным дном с черными стенками, чтобы предотвратить перекрестные помехи между образцами и обеспечить точное количественное определение люминесценции.

Добавьте в лунки бактериальную культуру с нужной концентрацией клеток.

Добавьте антибиотик для поддержания удержания плазмиды.

Добавьте индуктор для инициации экспрессии генов.

Ген кодирует фермент, который реагирует со специфическим бактериальным белком с образованием света, придавая бактериям биолюминесцентные свойства.

Накройте пластину крышкой, чтобы предотвратить испарение, прежде чем помещать ее в считыватель пластин с регулируемой температурой и режимом постоянного встряхивания.

Через равные промежутки времени записывайте поглощение для измерения количества клеток и интенсивности света для мониторинга биолюминесценции. Коррелирует плотность клеток с биолюминесценцией.

Вв