Выращивание бактерий Magnetospirillum и оценка их магнитотаксического поведения

Магнитоспириллы — это подвижные бактерии, которые процветают при низком содержании кислорода.

Они производят магнитные нанокристаллы, которые действуют как магнитные диполи, помогая им ориентироваться в геомагнитном поле к оптимальной концентрации кислорода.

Для культивирования Magnetospirillum берут бескислородные жидкие среды. Вводите контролируемый объем кислорода для создания микроаэробных условий, добавляйте бактерии и инкубируйте.

Со временем помутнение увеличивается, что свидетельствует о росте бактерий.

Для приготовления полутвердой культуры используют среду, содержащую розовый индикатор кислорода, который становится бесцветным в зоне с низким содержанием кислорода, отмечая кислородно-бескислородную границу раздела (OAI) с оптимальной

концентрацией кислорода.

Привите бактерии в OAI, запечатайте пробирку и инкубируйте.

Бактерии размножаются, образуя полосу, которая мигрирует вверх по мере потребления кислорода.

Чтобы оценить магнитотаксическое поведение, приготовьте висячую каплю культивируемых бактерий и поместите рядом с ней магнит.

Под микроскопом наблюдайте направленное плавание к магниту и обратное движение при переворачивании магнита.

Чтобы инокулировать штаммы MSR-1, AMB-1 и MS-1 в жидкую среду, обжигайте крышки бутылок с кислородом и свежей средой, нанося этанол на пробки и пропуская их через пламя горелки Бунзена.

С помощью стерильного шприца и иглы извлеките один миллилитр кислорода из кислородного баллона и переложите его в флакон со свежей средой. Если вы используете посевной материал от другой культуры, выращенной в стеклянной бутылке, обжарьте обе бутылки. Затем инокулируйте один миллилитр более старой культуры в свежую среду.

Инкубируйте культуру при температуре 32 градуса Цельсия и завивайте ее в свежую среду через четыре-семь дней. Чтобы инокулировать MSR-1 в полутвердую среду с градиентом кислорода, убедитесь, что пробирка со свежей средой имеет четко выраженный OAI, материализованный в виде границы раздела от розового до бесцветного на глубине от одного до трех сантиметров ниже поверхности среды. Если инокулюм получен из другой полутвердой культуры с градиентом концентрации кислорода, соберите бактерии, аспирировав 50 микролитров культуры с помощью стерильного наконечника пипетки, помещенного на ленту, образованную бактериями.

Медленно вводите эти бактерии в OAI в свежую среду, не нарушая границу раздела. Закройте пробирку и дайте бактериям расти при температуре от 25 до 30 градусов по Цельсию. Чтобы убедиться, что бактерии являются как магнитными, так и модальными, поместите каплю культуры на защитное стекло микроскопа.

Откиньте крышку и установите ее на уплотнительное кольцо, опирающееся на предметное стекло. Следите за тем, чтобы капля не касалась нижнего предметного стекла. Поместите висячую каплю под микроскоп и сфокусируйтесь на краю капли.

Поместите южный полюс магнита близко к этому краю и наблюдайте, как бактерии плывут к краю. Переверните магнит, чтобы они плыли в противоположном направлении.