Выделение и обогащение внеклеточных везикул внешнего мембранного происхождения от бактерий

Начните с инокуляции колонии генетически модифицированных бактерий в жидкую среду.

Эти бактерии экспрессируют флуоресцентный гибридный белок во внешней мембране, внешнем защитном слое.

Инкубируются для того, чтобы бактерии выделяли внеклеточные везикулы (ВВ), мембранные наноструктуры, участвующие в межклеточной коммуникации, которые включают флуоресцентный белок.

Переложите культуру в бутылку и центрифугуйте на низкой скорости, чтобы гранулировать клетки.

Переносите надосадочную жидкость, содержащую EVs, клеточные белки и клеточный мусор. Центрифугируйте на высокой скорости и удалите надосадочную жидкость, содержащую мусор.

Отфильтруйте надосадочную жидкость через мембрану, чтобы удалить оставшиеся бактерии и мусор.

Прививаем образец на агар и инкубируем его. Отсутствие бактериальной колонии подтверждает отсутствие бактерий.

Перенесите раствор в ультрафильтрационное устройство с полупроницаемой мембраной и центрифугу, чтобы улавливать EV и устранять более мелкие белки.

Соберите концентрированные электромобили в пробирку для последующего анализа.

Начните с инокуляции отдельных колоний кишечной палочки в 250-1000 миллилитров бульона Лурия-Бертани, или LB, с помощью стерильной петли. Затем инк