Бактериальная трансинфекция Т-клеток in vitro путем формирования иммунологических синапсов

Начните с лунок, содержащих CD4⁺ Т-клетки, экспрессирующие рецепторы, специфичные к пептиду овоальбумина или OVAp.

В отрицательную контрольную лунку поместите пористую мембранную вставку.

Возьмите в пробирку дендритные клетки, зараженные бактериями и загруженные OVAp для поверхностного проявления.

Добавьте дендритные клетки непосредственно в тестовую лунку и во вставку в отрицательную контрольную лунку.

Добавьте в лунки среду и инкубируйте.

В тестовой лунке клетки взаимодействуют, образуя иммунологический синапс, облегчая перенос бактерий от дендритной клетки к Т-клетке, процесс, известный как трансинфекция.

В лунке отрицательного контроля мембранный барьер препятствует межклеточному взаимодействию, тем самым подавляя трансинфекцию.

Добавьте в лунки антибиотик гентамицин и инкубируйте.

Гентамицин не может проникать в эукариотические клетки, таким образом, убивая только неинтернализованные бактерии, в то время как интернализованные бактерии выживают.

Тестовый образец, содержащий инфицированные Т-клетки, и контрольный образец с неинфицированными Т-клетками теперь готовы к выделению Т-клеток и количественному определению трансинфекции.

К 24-луночному культуральному планшету добавьте два миллион