Фототаксисный анализ нитчатых цианобактерий с использованием сфокусированного светового освещения

Начните с чашки, содержащей нитевидную культуру цианобактерий, расположенной над небольшим окошком, оснащенным светодиодным держателем в темной комнате.

Светодиод освещает блюдо снизу, создавая небольшую световую зону.

Во время инкубации нитчатые цианобактерии мигрируют к освещенному центру, демонстрируя фототаксис.

Со временем цианобактерии мигрируют и накапливаются в освещенном центре, образуя заметно плотную бактериальную зону.

После инкубации положите под тарелку белую бумагу для усиления контраста.

Сделайте снимок освещенной области и проанализируйте его с помощью программного обеспечения.

Проведите линию поперек чашки, которая проходит через центр бактериальной зоны, чтобы создать профиль интенсивности пикселей.

Сравните среднюю интенсивность пикселей снаружи и внутри бактериальной зоны.

Затем проведите линию с максимальной интенсивностью в пределах центральной области, чтобы определить диаметр бактериальной зоны, которая представляет собой фототаксис цианобактерий.

Подготовьте держатели светодиодов, в которых установлены пятимиллиметровые светодиоды, чтобы облучать площадь 20 миллиметров квадрата снизу вверх. Измерьте и отрегулируйте интенсивность светодиодов. Убедитесь, что вся обстановка находится в темной комнате или закрытом темном контейнере.

Поместите восемь миллилитров среды, содержащей P. lacuna , в шестисантиметровую чашку Петри, закройте чашку Петри крышкой и поместите ее на держатель для светодиодов так, чтобы светодиод находился в центре чашки Петри. Как правило, через два дня сделайте снимок чашки Петри с помощью камеры смартфона, направленной непосредственно на место световой обработки. Используйте держатель и белый лист в качестве фона, чтобы обеспечить одинаковое расстояние и условия освещения для каждого изображения.

Откройте программу ImageJ, нажмите «Файл», «Открыть» и выберите файл. Затем нажмите на Enter. Выберите прямую кнопку и нажмите левую кнопку мыши, чтобы провести линию от одного конца чашки Петри до противоположного конца.

Следите за тем, чтобы леска проходила через центр круга из нитей. Нажмите «Анализ и измерение», чтобы увидеть длину чашки Петри. Затем нажмите «Анализ и построение профиля» в меню ImageJ.

Оцените среднее значение интенсивности пикселей за пределами круга и другое среднее значение интенсивности пикселей внутри круга. Наведите указатель мыши на положение Y между этими значениями, чтобы оценить значения X обеих сторон круга. Запишите оба значения и рассчитайте разницу.

Затем выберите прямую кнопку и проведите линию на средне-максимальном значении интенсивности пикселя. Наконец, нажмите «Анализ», а затем «Измерить», чтобы получить длину внутреннего круга ячейки.