Оценка прикрепления пневмококка к первичным эндотелиальным клеткам человека при постоянном потоке среды

Поместите покрытое желатином предметное стекло, подключенное к микрофлюидному насосу, на предметный столик микроскопа.

Слайд содержит первичные эндотелиальные клетки человека, культивируемые в текучей среде, с нитями фактора фон Виллебранда или VWF, гликопротеина, на поверхности клетки.

Эти нити генерируются путем стимуляции клеток гистамином.

Контролируемый поток среды, подаваемый через микрофлюидный насос, способствует секреции и разматыванию VWF. При этом в строках VWF предоставляются определенные домены привязки.

Остановите поток среды, добавьте зеленое флюорконъюгированное VWF-специфическое антитело и возобновите поток, чтобы пометить нити антителом.

Приостановите поток среды и введите красные флуоресцентные белки-экспрессирующие бактерии пневмококков.

Возобновите поток, чтобы распределить бактерии, обеспечивая прикрепление к обнаженным доменам через поверхностные адгезины.

Используя флуоресцентную микроскопию, визуализируйте связывание бактерий с нитями в режиме реального времени.

Остановите поток среды и получите изображения Z-стека для количественной оценки прикрепления бактерий к эндотелиальным клеткам.

Для микроскопической визуализации поместите жидкостный блок в камеру нагрева пр