Получение и выделение спор Streptomyces venezuelae из жидкой культуры

Начните с колбы, содержащей источник и наполненной богатой питательными веществами средой, которая поддерживает полный жизненный цикл бактерий Streptomyces venezuelae .

Внесите бактериальные споры в среду и инкубируйте с встряхиванием, чтобы обеспечить надлежащую аэрацию и распределение питательных веществ.

Пружина улучшает перемешивание, поддерживая равномерный и постоянный рост.

Споры поглощают питательные вещества и прорастают, образуя зародышевые трубки, которые расширяются на их кончиках, разветвляются на гифы и развиваются в мицелиальную структуру.

По мере того, как питательные вещества становятся ограниченными, организм вырабатывает специальные спорогенные гифы, которые делятся и производят споры, спящие репродуктивные клетки.

Наблюдайте под фазово-контрастным микроскопом, чтобы подтвердить наличие фрагментов мицелия и спор.

Центрифугируйте культуру, чтобы удалить более тяжелые остатки мицелия, оставив более легкие споры в надосадочной жидкости.

Перенесите надосадочную жидкость в микропробирку и положите ее на лед, чтобы предотвратить преждевременное прорастание.

Споровую суспензию развести в свежей среде и хранить в холодных условиях до дальнейшего использования.

Инокулируйте 30 миллилитров питательной среды с 10 микролитрами спор из штамма S.venezuela , подлежащего визуализации. Для постоянного роста и спорообразования клеток используйте колбу с перегородкой или колбу с пружиной, обеспечивающей достаточную аэрацию.

Культивируйте клетки в течение 35-40 часов при температуре 30 градусов Цельсия и 250 оборотах в минуту. Когда все будет готово, вы сможете увидеть фрагменты мицелия и споры с помощью жидкостной фазово-контрастной микроскопии. Центрифугируйте один миллилитр культуры в настольной центрифуге при 400-кратном G в течение одной минуты, чтобы гранулировать мицелий и более крупные фрагменты клеток.

Затем переложите примерно 300 микролитров надосадочной жидкости, содержащей взвесь спор, в новую 1,5-миллиметровую пробирку и поместите пробирку на лед.