Флуоресцентная покадровая визуализация жизненного цикла Streptomyces venezuelae

Возьмите микрофлюидную пластину с лункой, содержащей споры Streptomyces venezuelae, бактерии, образующей гифы.

Другие выделенные скважины содержат либо богатые питательными веществами, либо отработанные среды.

Споры получены из штамма, экспрессирующего флуоресцентные белки DivIVA и FtsZ, которые локализуются на концах гиф и поперечных стенках соответственно.

Нанесите иммерсионное масло на линзу объектива инвертированного микроскопа и на окно изображения пластины.

Установите пластину на предметный столик микроскопа и начните покадровую съемку.

Загрузите споры в камеру для культивирования планшета.

Затем введите богатую питательными веществами среду, чтобы инициировать прорастание спор.

По мере роста гиф DivIVA накапливается на концах гиф, в то время как FtsZ образует разрозненные кольца на поперечных стенках.

Далее переключитесь на отработанную среду. Недостаток питательных веществ в этой среде способствует спороношению.

В прорастающих гифах очаги DivIVA исчезают, а FtsZ перестраивается в регулярную лестницу из делительных колец, образуя споруляционные перегородки.

Со временем исчезновение флуоресценции FtsZ в тех же гифах подтверждает завершение споруляции.

Предварительно прогрейте климатичес