Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:20 мин. • September 26th, 2025
Начнем с экспериментального растения с генетически модифицированными областями листьев, экспрессирующими большие нефлуоресцентные фрагменты зеленого флуоресцентного белка superfolder или sfGFP.
Введите в эти модифицированные участки бактерии Pseudomonas , содержащие эффекторные белки, помеченные небольшим нефлуоресцентным фрагментом sfGFP.
Инкубируйте для обеспечения взаимодействия между бактериями и клетками листьев.
Используя специализированную систему секреции, Pseudomonas доставляет меченые эффекторные белки в цитозоль листа.
Близость между большим и малым фрагментами GFP позволяет собрать их в функциональную флуоресцентную sfGFP, которая затем перемещается на плазматическую мембрану.
После инкубации удалите листовые диски с инъекционных участков.
Визуализируйте эти диски с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа.
Первоначально визуализируйте листовой диск с низкой интенсивностью лазера, чтобы свести к минимуму автофлуоресценцию. Затем увеличьте мощность лазера для улучшения видимости.
Зеленая флуоресценция подтверждает успешную бактериальную инфекцию и доставку эффекторного белка в клетки растений.
Для листьев Nicotiana benthamiana инфильтрируйте суспензию Pseudomonas в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео