$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Возьмите покровное стекло с фоторазлагаемым гидрогелевым слоем, который содержит захваченные колонии бактерий, генетически модифицированные для излучения флуоресценции.
Поместите покровное стекло в держатель.
Добавьте фильтрующий материал для предотвращения обезвоживания образца.
Под светлопольным микроскопом сфокусируйтесь на одной интересующей вас колонии.
Используя соответствующее программное обеспечение, разработайте световой шаблон для извлечения клеток на периферии колонии, чтобы разрушить структурные связи гидрогеля и свести к минимуму воздействие ультрафиолета на клетки.
Отрегулируйте интенсивность ультрафиолетового излучения и продолжительность воздействия.
Инициируйте воздействие ультрафиолетового излучения, чтобы разорвать структурные связи в гидрогеле на открытых участках, которые способствуют высвобождению целевой колонии.
С помощью флуоресцентного фильтра определите колонию.
Поместите наконечник трубки в это место, а другой конец подсоедините к шприцу.
Переключитесь в режим светлого поля и с помощью шприца аспирируйте освободившуюся колонию.
Переложите колонию в пробирку для дальнейшего анализа.
Поместите образец в держатель PDMS и добавьте определенную среду поверх образца, чтобы предотвратить обезвоживание образца и обеспечить несущее решение для высвобождающихся клеток. После того, как калибровочное зеркало находится в нужном положении, отрегулируйте фокус микроскопа, чтобы получить четкое изображение колоний внутри гидрогеля или микролунки, и проведите осмотр, чтобы идентифицировать колонии или лунки, представляющие интерес.
Здесь можно спроектировать световые узоры, в то время как вид с камеры показывает колонии внутри образца, чтобы протестировать различные шаблоны для извлечения клеток и сохранить заданный шаблон. Затем выберите раздел управления сессией, добавьте сохраненную последовательность под вкладкой с названием продукта инструмента с узорчатой подсветкой. Выберите опцию стимуляции рисунка для просмотра и настройки нужного места экспозиции.
Затем отрегулируйте интенсивность света до 60% и время экспозиции до 40 секунд на вкладке управления светодиодами и начните процесс экспозиции. Контролируйте деградацию гидрогеля в режиме реального времени и в режиме Brightfield, чтобы обеспечить высвобождение клеток. Чтобы собрать высвободившуюся ячейку, поменяйте фильтр микроскопа с Brightfield на TRITC, чтобы визуализировать обнаженную область образца невооруженным глазом.
После того, как открытая область будет обнаружена, поместите конец трубки на облученное место, затем переключите фильтр микроскопа обратно на Brightfield для мониторинга извлечения клеток в режиме реального времени. С помощью шприца, прикрепленного к другому концу трубки, осторожно извлеките 200 микролитров раствора, содержащего высвобождающиеся клетки, и переложите раствор в центрифужную пробирку диаметром 1,5 мм для анализа ДНК или нанесения покрытий