Моделирование колонизации влагалища мышей анаэробными бактериями

Возьмем, к примеру, самку мыши, которую лечат гормоном, который кондиционирует среду влагалища, повышая ее восприимчивость к инфекциям.

Поднимите мышь за хвост, пока она захватывает клетку передними лапами, чтобы приподнять задние конечности и обнажить вход во влагалище.

Промойте просвет влагалища анаэробным буфером, чтобы вымыть слизь, защитный барьер против патогенов, а также мертвых эпителиальных клеток и эндогенных микробов влагалища.

Немедленно введите во влагалище суспензию анаэробного бактериального патогена, при этом удерживая мышь, чтобы свести к минимуму потерю жидкости.

Для совместного инокуляции следует ввести суспензию другого анаэробного бактериального патогена, используя тот же объем, что и ранее.

Привитую мышь следует содержать отдельно от непривитых мышей, чтобы предотвратить перекрестное заражение.

После инокуляции бактерии прикрепляются к эпителию влагалища, разрастаются в колонии и развивают защитный слой биопленки, который действует как барьер против иммунных реакций хозяина.

Подготовьте пробирки для вагинального лаважа в анаэробной камере путем пипетирования 70 микролитров стерильного анаэробного PBS в 1,5-миллилитровые микроцентрифужные пробирки, помеченные номерами мышей.

Плотно закройте трубки и выньте их из камеры. Для проведения вагинального промывания сначала поместите мышь на клетку, за которую она может схватиться передними лапами. Затем аккуратно возьмитесь за среднюю часть хвоста и поднимите его так, чтобы задние конечности были немного приподняты, а вход во влагалище был открыт.

Набрав 50 микролитров PBS из маркированной пробирки, осторожно введите наконечник пипетки на два-три миллиметра в просвет влагалища, чтобы промыть его PBS путем пипетирования внутрь и наружу три-четыре раза. Затем переложите моющий материал обратно в исходную промывочную трубку с оставшимися 20 микролитрами неиспользованного PBS. Сразу после этого вагинального промывания сделайте прививку каждой мыши, вагинально перенеся 20 микролитров бактериальной суспензии или средства контроля.

Для экспериментов по совместному инокуляции с двумя разными бактериальными штаммами отдельно вводите по 10 микролитров каждой бактериальной суспензии, а не смешивайте штаммы заранее. Чтобы предотвратить немедленное накопление введенного объема в области влагалища, продолжайте удерживать заднюю часть мыши вверх в течение 10-20 секунд. Перенесите привитую мышь в новую клетку или с уже привитыми соседями по клетке и повторите процедуру с другими мышами.