Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:30 мин. • September 26th, 2025
Для скрининга бактериальной устойчивости различных сортов томатов начните с 10-дневной рассады томатов, выращенной в стерильных условиях.
У этих сеянцев появляются настоящие листья и укоренившиеся корни.
Наполните оба штамма патогенными бактериями, смешанными с поверхностно-активным веществом, чтобы обеспечить равномерное распределение инокулюма по поверхности растения. Наклоняйте и прополощите пластину, чтобы максимизировать контакт рассады с инокулянтом.
Удалите излишки инокулята, запечатайте пластины и инкубируйте их в камере роста.
Бактерии проникают через устьица и колонизируют апопласт, внеклеточное пространство между клетками листа.
Бактерии вводят эффекторные белки в клетки растений для подавления иммунных реакций растений.
Восприимчивые штаммы не обнаруживают эти эффекторы, что приводит к размножению бактерий и индуцированному бактериальным токсином повреждению тканей растений.
Устойчивые штаммы распознают эффекторы и производят активные формы кислорода для уничтожения бактерий.
После инкубации устойчивые штаммы демонстрируют устойчивый рост, в то время как восприимчивые штаммы демонстрируют замедленное развитие.
Перенесите пластины с десятидневными саженцами из камеры выращивания в шкаф биобезопасности и снимите хирургический пластырь. Затем переложите по шесть миллилитров инокулюма на каждую пластину.
Аккуратно протолкните рассаду в инокулянт с помощью кончика пипетки и запустите таймер на три минуты. Держите по одной тарелке в каждой руке и наклоните переднюю часть тарелки вниз, чтобы погрузить семядоли и листья рассады. Прополощите инокулянт из стороны в сторону пять-семь раз, затем откиньте пластины назад, чтобы покрыть корни инокулюмом.
Снова наклоните пластины вниз и повторяйте цикл в общей сложности три минуты. Вылейте инокулянт с пластин, положите их на ровную поверхность и слейте остатки инокулюма во второй раз. Снова оберните пластины и поместите их обратно в камеру роста.