Выделение и культивирование бактерий Clostridioides difficile из кишечника личинок данио-рерио

Начните с усыпленной личинки данио-рерио с кишечником, зараженным патогенной анаэробной бактерией Clostridioides difficile.

Закрепите верхнюю спинную часть туловища личинки и удалите ее голову, чтобы обнажить внутренние органы.

Закрепите среднюю часть спинного туловища и аккуратно изолируйте кишечник от полости тела.

Переложите изолированную кишку в микроцентрифужную пробирку, содержащую буфер.

Гомогенизируйте кишечник с помощью пестика, чтобы разрушить ткани и высвободить кишечные микробы.

Перенесите гомогенат в пробирку, содержащую селективную среду для выращивания с добавлением антибиотиков.

Инкубируйте гомогенат в анаэробной камере.

Анаэробные условия подавляют рост аэробных бактерий, в то время как антибиотики целенаправленно нацелены на рост нативных анаэробных кишечных микробов и подавляют их.

Clostridioides difficile устойчив к этим антибиотикам и размножается в анаэробных условиях.

Питательные вещества и факторы роста в питательной среде способствуют дальнейшему делению клеток, что способствует росту жизнеспособных Clostridioides difficile.

После усыпления зараженных личинок данио-рерио вставьте иглу в спинной ствол личинок данио-рерио близко к голове, чтобы обездвижить данио-рерио.