JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:46 мин • September 26th, 2025
Начните с жидкой культуры Sporosarcina pasteurii в среде, богатой питательными веществами.
Возьмите обогащающий исходный раствор, содержащий мочевину, хлорид кальция, хлорид аммония и бикарбонат натрия.
Добавьте порцию обогащающей среды в пробирку для бактериальной культуры.
Сделайте трубки вихревыми, чтобы равномерно перемешать бактериальные клетки и питательные вещества.
Инкубируйте обогащенные культуры в инкубаторе, не встряхивающем.
Sporosarcina pasteurii, грамположительная почвенная бактерия, вырабатывает фермент уреаза в присутствии мочевины.
Уреаза расщепляет мочевину на ионы аммония и карбоната.
Хлорид аммония и бикарбонат натрия помогают поддерживать щелочной pH, который способствует выпадению минералов в осадок.
Ионы карбоната вступают в реакцию с ионами кальция из хлорида кальция с образованием нерастворимого карбоната кальция.
Этот осадок начинает образовываться вокруг бактериальных клеток и кристаллизуется в кальцит, стабильную кристаллическую форму.
Эти кристаллы оседают в виде белых отложений на дне трубки, демонстрируя микробиологически вызванное осаждение кальцита, или MICP.
Переложите девять миллилитров приготовленной жидкой культуры в несколько стерилизованных десятимиллилитровых центрифужных пробирок. Приготовьте 100 миллилитров исходного раствора для наружного обогащения с помощью аналитических весов, чтобы тщательно отмерить два грамма на литр мочевины, один грамм на литр хлорида аммония, 212 мг на литр бикарбоната натрия и 280 мг на литр хлорида кальция.
В стакан со свежей средой соедините все ингредиенты, кроме мочевины, и автоклав. После автоклавирования смешайте мочевину с одним миллилитром свежей среды и пропустите раствор через шприц с фильтром 0,2 микрометра перед добавлением в обогащающую среду. Добавьте один миллилитр обогащающей среды с добавками в стерилизованные центрифужные пробирки, содержащие девять миллилитров приготовленной культуры.
Сделайте вихревую насадку в каждой трубке и инкубируйте в инкубаторе без встряхивания при температуре 30 градусов Цельсия. Регулярно контролируйте все агрегаты на предмет начала выпадения осадков.