Получение биолюминесцентной энтерогеморрагической Escherichia coli Inoculum

Начните с замороженного запаса энтерогеморрагической кишечной палочки или ЭГКП, патогенной кишечной бактерии.

Эти бактерии несут плазмиду, которая экспрессирует люциферазу для биолюминесцентной визуализации в реальном времени и ген устойчивости к антибиотикам для селекции.

Поместите бактерии на агаровую пластину, содержащую соответствующий антибиотик, и инкубируйте, чтобы выделить отдельные колонии, содержащие плазмиды.

Выберите одну колонию и культивируйте ее в бульоне с антибиотиками. Инкубируйте для размножения генетически однородной, устойчивой к плазмидам популяции.

Разрастайте культуру в аэрированных условиях, чтобы синхронизировать клетки в логарифмическом росте.

Следите за ростом бактерий до тех пор, пока не будет достигнута желаемая оптическая плотность.

Далее центрифугируйте культуру для гранулирования бактерий.

Удалите надосадочную жидкость, а гранулы промойте стерильным физиологическим раствором.

Снова центрифуга. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в меньшем объеме физиологического раствора.

Эта концентрированная суспензия ЭГКП теперь готова к отслеживанию на основе биолюминесценции.

Для начала нанесите на пластину с 50 микрограммами канамицина 50 ми