JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 3:28 мин • September 26th, 2025
Возьмите бак, содержащий стерильную питательную среду с кислым pH.
Перенесите в емкость сетчатый экран с рассадой растений.
Запечатайте крышкой и пористой лентой для поддержания стерильности и обеспечения газообмена.
Инкубируйте с встряхиванием, чтобы проветрить среду.
Осмотрите среду, чтобы убедиться в отсутствии помутнения, указывающего на отсутствие бактериального загрязнения.
Найдите образец на планшете для культивирования и инкубируйте его, чтобы наблюдать за отсутствием роста бактерий, подтверждающих отсутствие загрязняющих бактерий.
Привите агробактерию, патоген растений, и инкубируйте.
Сигнальные молекулы, полученные из корней растений, и кислый pH активируют бактериальный мембранный сенсорный белок.
Активация индуцирует экспрессию генов, производя белки для прикрепления бактерий к поверхности корней.
После прикрепления агробактерии доставляют фрагмент ДНК, известный как транспортная ДНК (Т-ДНК), в клетки растения с помощью системы секреции.
После интеграции в геном растения Т-ДНК синтезирует сигнальные молекулы, которые усиливают бактериальную колонизацию.
В стерилизованный проточный колпак налить 18 миллилитров автоклавной жидкой среды МС в стерильные цилиндрические стеклянные баки со стерильными крышками.
Затем с помощью стерильных щипцов аккуратно перенесите каждый квадрат сетки с рассадой в возрасте от 10 до 14 дней из чашки Петри полутвердой среды в гидропонный цилиндрический резервуар. Показанная здесь рассада – люцерна. Запечатайте крышки баков с помощью пористой хирургической ленты.
Затем культивируйте рассаду при температуре от 22 до 24 градусов Цельсия с 16-часовым периодом фотосъемки и встряхиванием при 50 оборотах в минуту. Перед прививкой внимательно осмотрите емкость с рассадой на предмет возможного загрязнения. Среда в незагрязненных резервуарах должна быть прозрачной и прозрачной.
Если баки мутные от загрязнения, выбросьте их и пронумеруйте остальные баки. Возьмите по 20 микролитров гидропонной среды из каждого пронумерованного аквариума и положите ее на чашку Петри с бульоном Лурия или агаром LB. Выдерживайте блюдо при температуре 28 градусов Цельсия в течение 28 часов.
Немедленно закиньте в каждый пронумерованный гидропонный аквариум 50 микролитров суспензии Agrobacterium tumefacians в каждый пронумерованный гидропонный бак. Совместно культивируйте рассаду и бактерию A. tumefacians при температуре от 22 до 24 градусов Цельсия с 16-часовым периодом фотосъемки и встряхиванием при 50 оборотах в минуту. Осмотрите пятнистую пластину LB после 12 и 28 часов инкубации, чтобы убедиться в стерильности гидропонной питательной среды.
При наличии каких-либо загрязнений не используйте соответствующий пронумерованный резервуар, зараженный бактериями, для дальнейших последующих анализов.