Получение протопластов из грамположительной бактерии Bacillus megaterium

Возьмем культуру Bacillus megaterium, грамположительной бактерии.

Разведите культуру в свежей среде и инкубируйте ее с встряхиванием, чтобы способствовать делению бактерий.

Переложите культуру в пробирку и центрифугуйте для гранулирования бактерий.

Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в среде, содержащей осмотические стабилизаторы, чтобы предотвратить лизис протопластов.

Переложите ресуспендированный раствор в колбу, добавьте лизоцим, и выдержите при встряхивании.

Во время инкубации лизоцим разрушает толстую клеточную стенку пептидогликана бактерий.

По мере деградации клеточной стенки бактерии изменяются от палочковидной формы к сферическим телам, ограниченным только плазматической мембраной, образуя протопласты.

Визуализируйте суспензию под микроскопом.

Круглые бактерии подтверждают образование протопластов, в то время как набухшие палочковидные бактерии указывают на неполное пищеварение.

Переложите раствор в пробирку и центрифугу для гранулирования протопластов.

Удалите надосадочную жидкость и ресуспендируйте протопласты в свежих средах, содержащих осмотические стабилизаторы, для дальнейшего анализа.

Чтобы получить грамположительные протопласты B. megaterium , разв