Оценка трансцитоза кишечной палочки через монослои эпителия кишечника

Начните с бактериологического исследования E. coli , выделенного у новорожденных с инфекциями кровотока.

Центрифугуйте для гранулирования бактерий, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в среде, не содержащей антибиотиков.

Возьмите пластину с трансвелловым вкладышем, содержащую монослой эпителиальных клеток кишечника.

Измерьте электрическое сопротивление по всему клеточному слою с помощью зонда, чтобы подтвердить целостность монослоя.

Добавьте бактериальную суспензию во вкладыш и инкубируйте.

Бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам, интернализуются в везикулах и транспортируются через клетки в нижнюю лунку с помощью процесса, называемого трансцитозом.

Еще раз измерьте электрическое сопротивление; Стабильное значение подтверждает наличие интактного монослоя при трансцитозе.

Переложите вкладыш в свежую лунку и соберите среду из предыдущей нижней лунки.

Выложите собранную среду на агаровую тарелку и инкубируйте для развития колоний бактерий.

Подсчитайте колонии, чтобы определить степень трансцитоза E. coli через кишечный эпителиальный барьер.

Каждые 30 минут после инокуляции заполняйте новые лунки 500 микролитрами ТКМ без антибиотиков и переносите вкладыши в эт