Приготовление и индукция культур Borrelia burgdorferi для получения вирусных частиц

Начните с культивирования генетически модифицированного штамма Borrelia burgdorferi, патогенной бактерии.

Этот штамм несет спящую ДНК бактериофага, интегрированную в его геном, который был спроектирован таким образом, чтобы включать ген-мишень, обеспечивающий устойчивость к антибиотикам.

Добавьте соответствующий антибиотик и инкубируйте культуру. Ген устойчивости к антибиотикам экспрессирует белок, который ингибирует антибиотик, обеспечивая пролиферацию только бактерий, несущих этот ген.

Как только культура достигнет желаемой плотности, центрифугируйте клетки, чтобы гранулировать их, и выбросьте надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу, введите химический индуктор и инкубируйте, чтобы вызвать повреждение ДНК.

Результирующая реакция репарации ДНК иссекает ДНК бактериофага, инициируя ее репликацию, экспрессию структурных белков и сборку новых вирионов, несущих ген устойчивости к антибиотикам.

Снова центрифугируйте культуру, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в свежей среде.

Бактериальные клетки, содержащие зрелые вирионы, готовы к дальнейшему применению.

Введите 150 микролитров соответствующего клона Borrelia burgdorferi в 15 миллилитрах BSK в плотно