JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:02 мин • September 26th, 2025
Начните с пробирки, содержащей бактериальную культуру, генетически модифицированную для работы в качестве биосенсора.
Бактерии содержат плазмидную систему с красным флуоресцентным белком или геном RFP под контролем промотора. Промотор подавляется белком, который чувствителен к присутствию определенного аналита, например, свинца.
С помощью салфетки на основе этанола тщательно протрите тестовую поверхность и соберите аналит, присутствующий на поверхности.
Отрежьте небольшой участок от центра салфетки и полностью погрузите его в бактериальную культуру.
Инкубируйте для облегчения диффузии аналита из салфетки в бактериальную культуру.
Аналит проникает в бактерии и связывается с белком-репрессором, изменяя его конформацию и активируя промотор.
Активированный промотор инициирует транскрипцию гена, что приводит к экспрессии RFP.
Измерьте флуоресценцию бактерий, чтобы убедиться в присутствии анализируемого вещества на исследуемой поверхности.
Используйте салфетку на основе этанола, предназначенную для удаления свинца, чтобы протереть все поверхности рук, в том числе между пальцами. Храните салфетки в герметичном пакете с соответствующей маркировкой до анализа. Используйте салфетку на спиртовой основе, чтобы протереть все большие поверхности для тестирования.
Используйте ватный тампон, смоченный в этаноле, чтобы протереть любые мелкие поверхности для тестирования. Надев чистые перчатки и используя ножницы, которые были очищены спиртом, отрежьте участок, который находится примерно в одном квадратном сантиметре от центра салфетки. Затем поместите отрезанный кусок салфетки или ватного тампона прямо в культуральную пробирку, содержащую два миллилитра сенсорных бактерий, и убедитесь, что она полностью погружена в бульон.