Выделение грамотрицательных бактерий с помощью геномных транспозонных вставок

Начните с размораживания замороженной культуры спаренного донора и реципиентной популяции грамотрицательных бактерий на льду.

Клетки-реципиенты несут транспозоны, короткие сегменты ДНК, которые включают ген устойчивости к антибиотику канамицину. Эти транспозоны случайным образом интегрируются в геном хозяина.

Добавьте культуру в богатую питательными веществами агаровую тарелку, содержащую канамицин, но без донорских питательных веществ.

Добавьте стерильные бусины и аккуратно поверните тарелку, чтобы равномерно распределить культуру.

Удалите бусины и инкубируйте. Бактерии-реципиенты используют питательные вещества, но только те, у которых интегрированы транспозоны, устойчивы к канамицину, что приводит к образованию колоний.

Донорские и реципиентные бактерии без транспозонов не могут расти.

Подсчитайте колониеобразующие единицы, чтобы оценить количество бактерий-реципиентов с уникальными вставками транспозонов.

Добавьте свежие среды и соберите популяцию бактерий.

Центрифуга, чтобы удалить бактерии и выбросить надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в среде с криопротектором для сохранения жизнеспособности бактерий.

Разморозьте аликвоту замороженной случки на льду. Затем с помощью