Индуцированное компетенцией поглощение ДНК у золотистого стафилококка

Возьмите культуру S. aureus , чувствительную к антибиотику хлорамфениколу.

Центрифуга для гранулирования бактерий и удаления надосадочной жидкости.

Переложите гранулу в пробирку с питательными веществами и инкубируйте. Питательный стресс повышает компетентность — способность бактерии усваивать чужеродную ДНК.

Снова центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте гранулу в свежей среде, ограничивающей питательные вещества.

Затем добавьте ДНК, выделенную из штамма S. aureus , несущего ген, устойчивый к хлорамфениколу. Инкубировать.

Механизм поглощения ДНК перерабатывает ДНК в одну цепь и перемещает ее в цитоплазму, где она интегрируется в бактериальную хромосому.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте гранулу в среде, богатой питательными веществами.

Перенесите суспензию в расплавленный богатый питательными веществами агар, содержащий хлорамфеникол.

Вылейте смесь в посуду и высушите.

Рост колоний, устойчивых к хлорамфениколу, указывает на успешное поглощение ДНК.

Культивируйте клетку-реципиента в течение ночи, в пяти миллилитрах TSB при 37 градусах Цельсия с встряхиванием. На следующее утро перелейте 0,5 миллилитров ночной культуры в 1,5