Многолуночный анализ на жидкостной основе для скрининга нокдаунов C. elegans

Возьмите многолуночный планшет, содержащий агаровую среду, предварительно пятнистую РНК-интерференцией, с ген-специфичной вставкой, нацеленной на ген C. elegans , или без нее.

Семена синхронизировали червей L1-стадии в лунках и инкубировали их, чтобы обеспечить питание РНК-интерференционными бактериями.

Вставка производит интерферирующую РНК, которая нацелена на конкретные гены червей, генерируя ген-специфичный фенотип нокдауна.

Добавьте буфер в лунки и аккуратно восстановите суспендию червей.

Перенесите суспензию в глубоколуночную пластину и дайте червям осесть под действием силы тяжести.

Удалите надосадочную жидкость, сохранив при этом некоторый буфер.

Промойте червей буфером, затем выбросьте надосадочную жидкость, оставив небольшое количество буфера.

Далее возьмите многолуночный планшет для анализа, содержащий болезнетворные бактерии.

Внесите определенное количество контрольных и нокдаун-червей в соответствующие лунки, чтобы обеспечить взаимодействие хозяина и патогена. Патогенные бактерии выделяют соединения, которые вызывают смертность глистов.

Сравните смертность червей, чтобы оценить влияние ген-специфического нокдауна на выживаемость червей.

Добавьте один миллилитр S базала в лунку 2