Оценка смертности, вызванной патогенными бактериями, у личинок C. elegans

Начните с патогенной бактерии, культивируемой на агаре.

Соскребите бактерии, суспензируйте их в буфере и добавьте среду для поддержания жизнеспособности бактерий.

Дозируйте суспензию в микропланшет.

Затем возьмите отдельные штаммы личинок C. elegans либо с повышенной восприимчивостью к патогенам, либо с повышенной сопротивляемостью, и дайте им поселиться.

Удалите надосадочную жидкость, повторно суспендируйте личинки в свежей среде и перенесите их в микропланшет, содержащий бактерии.

Запечатайте микропланшет газопроницаемой мембраной и инкубируйте. Бактерии выделяют токсичные метаболиты, которые активируют пути стресса и приводят к гибели клеток.

Промойте лунки, чтобы уничтожить бактерии, добавьте непроницаемый для клеток флуоресцентный краситель и инкубируйте.

Краситель проникает только в погибшие личиночные клетки с нарушенными мембранами и связывается с их нуклеиновыми кислотами.

Промойте для удаления излишков красителя и сфотографируйте окрашенных флуоресцентно окрашенных червей, чтобы оценить смертность восприимчивых и устойчивых штаммов.

Для проведения анализа на уничтожение жидкости с помощью скребка для удаления P. aeruginosa из SK-планшета и ресуспендирования бактерий примерно в 5 м