Культивирование и поддержание РНК-экспрессирующих бактерий

Начните с планшета, содержащего предварительно выращенные РНК-интерференционные или экспрессирующие РНК-интерференцию бактерии.

Эти бактерии несут плазмиды, содержащие ген устойчивости к антибиотикам и генную вставку-мишень, которая производит двухцепочечную РНК или дцРНК для ингибирования специфической экспрессии генов в организме хозяина.

С помощью стерильной булавки перенесите колонии в глубоколуночный планшет, содержащий среду, обогащенную антибиотиками.

Инкубируйте тарелку с встряхиванием для равномерного роста бактерий, где глубокие лунки обеспечивают аэрацию.

Антибиотик уничтожает бактерии, у которых отсутствует плазмида, гарантируя, что выживают только бактерии, содержащие плазмиды.

Центрифугируйте планшет, чтобы отделить бактерии, и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте бактерии в буферном солевом растворе, чтобы стабилизировать их.

Диспонируйте ресуспендированные бактерии в многолуночный планшет, содержащий богатую питательными веществами среду, дополненную антибиотиком и индуктором.

Антибиотик отбирает плазмидные бактерии, в то время как индуктор запускает экспрессию дцРНК.

Планшет, засеянный бактериями, экспрессирующими РНК-интерференцию, готов к дальнейшим исследован