Оценка индуцированной антибиотиками филаментации у E. coli с помощью анализа гальванических покрытий и проточной цитометрии

Начните с культуры кишечной палочки , предварительно обработанной антибиотиком.

Этот антибиотик блокирует деление клеток, в результате чего образуются удлиненные нитчатые клетки с повышенным содержанием ДНК.

Положите часть культуры на тарелку с богатым питательными веществами агаром и инкубируйте.

Нитевидные клетки не делятся, несмотря на продолжающийся рост; Только ненитевидные клетки образуют колонии, что приводит к низкому количеству колоний.

Разбавьте оставшуюся бактериальную культуру и добавьте флуоресцентный ДНК-связывающий краситель. Затем инкубируйте в темноте.

Краситель проникает в клетки и связывается с ДНК.

Сделайте образец вихревым потоком, а затем пропустите его через проточный цитометр.

Количество рассеянного света от каждой ячейки соответствует ее размеру.

Аналогичным образом, флуоресценция, испускаемая нуклеиновыми кислотами, связанными с красителем, указывает на содержание бактериальной ДНК.

Клетки, обработанные антибиотиками, демонстрируют повышенное рассеяние и флуоресценцию, отражая нитевидный рост и продолжающуюся репликацию ДНК без деления.

Это свидетельствует об изменениях в физиологии бактерий, вызванных антибиотиками, ингибирующими деление клеток.

Готовят десятикратны