Оценка роения бактерий с помощью пластины с ингибитором градиента

Возьмите градиентную роевую пластину с двухслойным агаром. Нижний слой, содержащий ингибитор, заливали для создания градиента ингибитора.

Пластина содержит изометрически расположенные лунки, чтобы обеспечить подходящее пространство для роения бактерий или коллективной миграции, предотвращая перекрытие роев.

Инокулируйте лунки бактериальной культурой и инкубируйте тарелку.

При низких концентрациях ингибиторов бактерии координируют свое жгутиковое движение, инициируя коллективную миграцию или роение.

При высоких концентрациях ингибитора ингибитор подавляет экспрессию генов, связанных со жгутиками.

Это приводит к ограничению движения жгутиков, что приводит к ограничению роевой подвижности.

Визуализируйте пластину в белом свете через равные промежутки времени, чтобы запечатлеть узор роения.

Во время визуализации регулируйте время экспозиции, чтобы повысить яркость роев.

Измените пороговые настройки, чтобы свести к минимуму фоновые световые помехи и повысить контрастность.

Сохраните изображение для последующего анализа влияния концентрации ингибитора на роение бактерий.

Добавьте в каждую лунку по 80 микролитров культуры ночного роста. Вынимайте роевые планшеты из инкубатора по одной каждые 12 часов и помещайте их в систему визуализации геля.

Выберите режим гелевой визуализации, подвергните пластину роя воздействию белого света и отрегулируйте фокусное расстояние, чтобы получить четкое изображение роев. Увеличьте яркость роев для точного наблюдения, регулируя время экспозиции до 300 миллисекунд. Отрегулируйте порог, чтобы свести к минимуму помехи от фонового света.

Сохраните файл изображения для дальнейшего анализа.