$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Бактериальная спора остается в спящем состоянии благодаря пептидогликановому коровому слою, полимеру сахаров и аминокислот.
Во время прорастания кора головного мозга деградирует, высвобождая сахара в окружающую среду.
Чтобы обнаружить деградацию коры головного мозга, начните со среды, содержащей высвобождающиеся сахара, собранные в определенные моменты времени во время прорастания спор.
Для справки используйте возрастающие концентрации стандартов сахара.
Стандарты и образцы подвергались предварительной обработке с целью превращения сахаров в реакционноспособную форму.
Инкубируйте с реактивом Эрлиха, колориметрическим реагентом для обнаружения, который реагирует с сахарами и образует комплекс фиолетового цвета.
Переложите смеси на многолуночный планшет и измерьте поглощение цветных комплексов с помощью считывателя микропланшетов.
Абсорбция соответствует интенсивности фиолетового цвета, которая прямо пропорциональна концентрации сахара.
Увеличение поглощения в образцах временных точек указывает на прогрессирующую деградацию коры головного мозга.
Постройте график на основе стандартных концентраций и количественно оцените концентрации образцов.
Пока образцы находятся на льду, приготовьте цветной реактив. Растворите 0,320 грамма ДМАБ в 1,9 миллилитрах ледяной уксусной кислоты. Обратите внимание, что этот реагент чувствителен ко времени, температуре и свету и не должен производиться заранее.
После того как DMAB полностью растворится, добавьте 100 микролитров 10 обычной соляной кислоты и перебейте образец в вихрь. Затем добавьте пять миллилитров ледяной уксусной кислоты и снова вортекс. Для колориметрической реакции перенесите 100 микролитров каждой охлажденной коры или контрольного образца в новую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитров.
Добавьте в каждый образец по 700 микролитров свежеприготовленного цветного раствора. Немедленно перенесите образцы на водяную баню с температурой 37 градусов Цельсия и инкубируйте образцы ровно 20 минут. После инкубации переложите по 200 микролитров каждого образца в прозрачную 96-луночную пластину.
Образцы должны быть желтого цвета, но они изменят свой цвет на фиолетовый, если присутствует восстанавливающийся сахар, который указывает на наличие коры головного мозга. Здесь многие образцы не показывают видимого фиолетового цвета. Тем не менее, образцы с содержанием 250, 500 и 5000 наномолей визуально отличаются от отрицательного контроля с нулевым наномолем.
С помощью считывателя пластин определите поглощение на 585 нанометрах. При измерении в наружном диаметре 585 нанометров сигнал, генерируемый стандартными образцами, лучше всего подходит для линейной регрессии.