Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:50 мин. • September 26th, 2025
Начните с культуры бактериального вида, который кодирует рекомбинантные белки, помеченные везикулярным нуклеирующим пептидом, или VNp, коротким пептидом, способствующим образованию везикул.
Добавьте в культуру индуктор и инкубируйте. Индуктор запускает экспрессию белка.
VNp встраивается во внутреннюю мембрану и способствует ее искривлению, инкапсулируя белки, помеченные VNp, в почковающиеся везикулы.
Переложите богатую пузырями среду в пробирку. Центрифугируйте его, чтобы отделить богатую везикулами надосадочную жидкость.
Далее отфильтруйте надосадочную жидкость, чтобы удалить остаточные загрязнения.
Затем пропустите фильтрат через другой мембранный фильтр для захвата везикул на поверхности мембраны.
Поместите мембрану в посуду и добавьте фосфатно-солевой раствор.
Аккуратно отсоедините пузырьки и переложите суспензию в чистую пробирку.
Ультразвуком нанесите суспензию, чтобы разрушить мембраны везикул и высвободить белки.
Центрифугируйте лизат для отделения фрагментов мембраны.
Полученная надосадочная жидкость содержит очищенные рекомбинантные белки, готовые к анализу.
Индуцируйте экспрессию рекомбинантного белка из промотора Т7 путем добавления IPTG до конечной концентрации до 20 микрограммов
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео