Перенос плазмид F и двойной выбор антибиотиков у E. coli

Начнем с донорских клеток E. coli , несущих F-плазмиду, в которой ген переноса заменен геном устойчивости к антибиотикам.

Эти клетки также содержат спасательную плазмиду, которая кодирует недостающий ген переноса.

Возьмем равное количество клеток E. coli реципиента с разным геном устойчивости к антибиотикам в их ДНК.

Смешайте обе культуры в питательных средах, не содержащих антибиотиков, и инкубируйте, не встряхивая.

Спасательная плазмида донорской бактерии экспрессирует ген переноса, позволяя донорской клетке строить F-пилус.

Пилус образует мост между двумя клетками, обеспечивая однонаправленный перенос плазмиды от донора к реципиенту, образуя трансконъюганты.

Сделайте смесь вихревой, чтобы нарушить брачные пары, и положите ее на лед, чтобы предотвратить дальнейшее спаривание.

Обнаружите культуру на агаровых планшетах, содержащих трансконъюгантные антибиотики, и инкубируйте.

Трансконъюганты, несущие оба гена устойчивости к антибиотикам, выживают и образуют колонии в присутствии обоих антибиотиков, подтверждая успешный перенос F-плазмид.

В двух экземплярах аликвотируют 100 микролитров донорских клеток и 100 микролитров клеток реципиента до 800 микролитров стерильных ЛБ-сред на один миллилит