Инактивация бактерий с помощью активируемого светом флавинмононуклеотида

Начните с инокуляции патогенной бактерии в пробирку, содержащую жидкую среду.

Инкубируйте, чтобы способствовать размножению бактерий, затем переложите культуру в свежие пробирки.

Раскрутите ячейки в гранулы и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте бактериальные гранулы в буферных растворах, содержащих возрастающие концентрации флавинмононуклеотида (ФМН), фотосенсибилизатор и буферный раствор без ФМН в качестве контроля.

Тщательно перемешайте содержимое тубы и переложите суспензию в стеклянные пробирки.

Подвергните трубки воздействию видимого света, чтобы фотоактивировать FMN, который реагирует с молекулярным кислородом с образованием активных форм кислорода (АФК).

АФК повреждает бактериальные клеточные компоненты, тем самым снижая жизнеспособность бактерий.

Перенесите образцы аликвот на твердую среду, равномерно распределите их и инкубируйте, чтобы выжить жизнеспособным бактериям удалось вырасти в колонии.

После инкубации количественно оцените колонии и рассчитайте процентное снижение жизнеспособности бактерий по сравнению с контролем для оценки дозозависимого эффекта ФМН.

Инокулируйте колонию золотистого стафилококка в 10 миллилитров лизогенного бульона в 15-миллилитровую пробирк