Количественная оценка инактивации бактерий, вызванной светом, путем генерации активных форм кислорода

Начните с буферизованной реакционной смеси, содержащей L-метионин, донор электронов, нитросиний тетразолий или NBT, окислительно-восстановительный индикатор, и флавинмононуклеотид или FMN, фотосенсибилизатор.

Добавьте эту смесь в пробирку, содержащую бактериальную гранулу и вихрь.

Переложите раствор в стеклянную трубку.

Теперь облучите смесь фиолетовым светом, чтобы активировать FMN, который принимает электрон из L-метионина, образуя реактивный промежуточный продукт.

Этот промежуточный продукт передает электрон растворенному молекулярному кислороду, генерируя активные формы кислорода или АФК вблизи поверхности бактерий.

Образующиеся в результате АФК повреждают клеточные компоненты и снижают жизнеспособность бактерий.

АФК также восстанавливает НБТ до формазана, продукта синего цвета, который осаждается вблизи поверхности бактерий.

Переложите смесь в пробирку, центрифугируйте ее и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте гранулу в органическом растворителе для растворения формазана.

Наконец, измерьте поглощение, чтобы определить индуцированную светом бактериальную инактивацию путем образования АФК.

Подготовьте образцы золотистого стафилококка, как описано ранее, чтобы получить клеточну